Comparative analysis of different methods of DNA extraction from human breast tumor samples

  • Edenir Inzez Palmero
  • Raphaela Lima Causin
  • Ana Julia Aguir Freitas
  • Cristovam Scapulatempo Neto
  • Henrique César Santejo Silveira
  • Marcia Maria Chiquitelli Marques Hospital de Cancer de Barretos/FACISB
Palavras-chave: extração de DNA, Buffy coat, FFPE, tecido congelado

Resumo

Introdução: Uma grande parte das pesquisas realizadas em todo o mundo depende das amostras armazenadas, que em sua maioria, serão submetidas ao processo de extração do material genético para análises em biologia molecular. Essas são fontes extremamente valiosa para muitos estudos. Estes incluem a pesquisa de mutações em genes críticos para o câncer, bem como a detecção de patógenos. Objetivo: Avaliar o impacto de diferentes métodos de extração de DNA de tecido parafinado, congelado e amostras de sangue. Resultado: Nós comparamos 13 métodos diferentes para a extração de DNA. Todas 63 amostras (20 tecidos parafinados, 23 tecidos congelados frozen e 20 amostras de sangue) foram obtidas de mulheres que realizavam tratamento de câncer de mama no Hospital de Câncer de Barretos. A pureza e rendimento do DNA extraído foi avaliado pelo NanoDrop® Spectophotometer. O fragmento de DNA amplificável foi avaliado por amplificação por PCR do gene APC e todas as extrações utilizadas independentemente da amostra foram consideradas adequadas para a amplificação de fragmentos de até 311 pb. Conclusão: Foi verificado que o QIAamp DNA FFPE Tissue kit apresentou melhor qualidade para as amostras de FFPE e também ótimo rendimento. Em relação as amostras de tecido fresco, foi visto ótimos valores de pureza e rendimento para o QIAamp DNA Mini and Blood Mini Kit. As amostras de buffy coat apresentaram melhores resultados com o QIAamp DNA Mini Blood and Mini Kit. Nós concluímos que o método de extração desempenha um papel importante em relação ao desempenho em aplicações moleculares.

 

Publicado
2019-12-19
Seção
Ciências Biológicas

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